Reco18研发团队在知名期刊《Frontiers In Endocrinology》发表学术论文:《含丁香、槐米和山药天然提取物的化合物通过多种机制提高老龄雌性小鼠的生育能力》,科研团队通过实验,展示了专为女性生育而开发的Reco18是如何改善卵巢功能,并帮助其更好生育的过程。
实验方法
研发团队采取动物实验,通过超数排卵、免疫印迹分析、免疫组织化学、活性氧 (ROS) 和线粒体膜电位测量和线粒体分布检测、体外受精 (IVF)、实时定量 PCR、HE染色和卵泡计数、小鼠血清激素水平测定、TUNNEL 分析、统计分析等多种技术手段与方法,观察到Reco18有效改善了实验鼠的卵巢功能及提高卵子和囊胚的质量和数量。
实验结果分析
1、提高卵母细胞的数量和质量
通过对使用Reco18的实验鼠排卵后卵母细胞进行计数,并对卵母细胞破碎率进行评估,每只小鼠排出的卵母细胞数从4. 11 增加到7.64 ,同时卵母细胞的破碎率从30.71%降低到 14.47%结果表明,Reco18 治疗后超排后的卵母细胞数量增加,且卵母细胞破碎率显著减少。
使用 ROS 绿色荧光探针标记并检测卵母细胞的氧化应激水平,评估ROS 绿色荧光强度并进行统计分析。结果表明,Reco18 治疗改善了衰老导致的卵母细胞中ROS 水平的增加,排卵后的卵母细胞质量得到改善。
2、Reco18改善体外胚胎发育和生育能力
通过对使用Reco18实验鼠小组的卵母细胞进行体外受精和胚胎培养,以评估其卵母细胞的发育潜力。
数据显示Reco18对胚胎发育起到有益作用,具体表现为 4-8细胞期、桑椹胚期和囊胚阶段的胚胎发育率增加。在 4-8-细胞期,其比率从 36.67%增加到 48.48%;桑椹胚期从 23.33%增加到 40. 15%;囊胚期的从 23.33%增加到 48.48%。
在Reco18治疗组中,总细胞数量从平均每个囊胚14.33个细胞增加到25.00个。
结果显示,Reco18治疗显著降低了囊胚中的细胞凋亡水平,增加了囊胚中的总细胞数。
与未使用Reco18的对照组相比,使用Reco18 组的卵巢的原始卵泡、生长卵泡和黄体的百分比更高。
未服用Reco18的小鼠中,只有40%的雌性小鼠产仔,平均每只雌鼠产崽1.6只;而所有接受Reco18 治疗的小鼠均有产仔,平均每只产仔8.4只。结果显示,Reco18改善了生育能力。
3、Reco18通过促进卵巢颗粒细胞增殖和减少细胞凋亡提高生育能力
科研团队用PCNA 免疫组化染色检测小鼠的细胞增殖水平,结果显示生长卵泡阶段,使用Reco18小鼠的卵泡周围颗粒细胞数量高于对照组,Reco18 可以促进颗粒细胞的增殖。
使用蛋白质印迹分析对照组和使用Reco18组小鼠卵巢中的细胞凋亡水平,数据显示Reco18 组小鼠的卵巢细胞凋亡水平低于对照组,这表明Reco18可以降低衰老卵巢的细胞凋亡水平。
4、Reco18通过提高血清性激素水平和卵巢激素相关mRNA 表达来提高生育能力
研发团队对高龄小鼠使用Reco18,通过ELISA测定血清AMH、FSH和E2水平。结果表明,Reco18治疗可提高老龄小鼠血清 AMH和E2雌激素水平,AMH水平从376.69ng/L增加到580.61ng/L,E2水平从10.73pg/ml 增加到19.33pg/ml。
通过类固醇激素相关mRNA表达的qRT-PCR分析,结果显示Reco18 治疗后卵巢中 Amhr 和 Fshr mRNA 的水平增加。结果表明,Reco18通过提升卵巢激素相关mRNA 表达来改善了生育能力。
5、Reco18通过改善卵巢中抗氧化因子和炎性相关因子的表达来提高生育能力
使用Reco18后的小鼠卵巢中一些抗氧化因子SOD-1 (超氧化物歧化酶 1)、CAT(过氧化氢酶)和GSS(谷胱甘肽合成酶) mRNA的表达增加。
此外,使用达Reco18后,小鼠卵巢中一些炎性因子的表达降低,如 IL-6 、TNFα和iNOS。
总之,Reco18 能有效降低卵巢的氧化应激水平,改善其炎性环境。
6、Reco18安全性试验
为了测试Reco18 的生物安全性,研发团队另外准备了 40周龄的雌性 ICR 小鼠,用 2 倍剂量的Reco18 灌胃一个月,并检测了两组小鼠的肝肾功能和血脂等血生化指标及体重指标。结果表明,用正常剂量和高剂量的Reco18对小鼠进行一个月的灌胃,小鼠体重、肝肾功能和血脂水平没有造成毒副作用及不良影响。Reco18在提升生育力的同时,有效保证了食用安全。
结论
Reco18中含多种天然植物提取物的化合物通过多种机制,可提高血清雌激素水平、促进卵泡生长和成熟、增加抗氧化因子的表达、降低炎性相关因子的表达以及降低与年龄相关的卵巢细胞凋亡水平,有效提高了生育能力。目前,关于Reco18的作用的相关临床课题正持续进行中,未来将公布更多实验结果及数据。